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质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋 、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链 、开环。
琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关,分子构象越大 ,摩擦阻力越大,第一条带是超螺旋带应该最亮,因为超螺旋结构完整紧密 ,跑得最快。第二条带为直链线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA,不如超螺旋紧密,跑得相对慢 。第三条带为开环质粒 ,DNA双链的其中一根断开,导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构,结构臃肿,跑得最慢。
扩展资料:
琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率在于摩擦阻力的问题 ,琼脂就像有孔海绵分子筛,细菌质粒提取中电泳会出现三条带,最快的是超螺旋带 ,它是完整的,因为它的构型紧密,跑得快。 第二条带在中间 ,是直链带,即环状双链DNA 两条链均断开,其分子构象变为线性 ,不如超螺旋紧密,跑得就慢一点 。最慢的是开环带,即环状双链DNA 有一条链断开 ,拖着一条尾巴,显得很臃肿,所以跑得最慢。
参考资料:
百度百科——DNA
质粒电泳条带比实际条带大。质粒电泳条带比实际条带大的原因主要有以下几个:
1、质粒线性化:在质粒电泳前,会将质粒进行酶切 ,使其线性化,方便进行大小的测定 。线性化的质粒会比未切割的环状质粒要大。
2、拉伸效应:在电场作用下,DNA分子会在凝胶中移动 ,并且会发生一定程度的拉伸。这种拉伸效应会使得质粒电泳条带在凝胶上呈现比实际大小更大的效果。
3 、堆积效应:在电泳过程中,质粒DNA在凝胶中会发生堆积或聚集,导致条带在凝胶上表现得更宽 ,从而看起来比实际条带大 。
4、胶溶效应:有时质粒DNA在电泳过程中会出现胶溶的现象,这会导致条带模糊或呈现不规则形状,使得条带看起来比实际大小大。
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